2024, Vol. 48
表1(Table 1)
球参多糖的分离纯化及体外抗凝血活性研究
文章信息
- 刘静雯, 吴宁, 耿丽华, 王晶, 岳洋, 张全斌. 2024.
- LIU Jingwen, WU Ning, GENG Lihua, WANG Jing, YUE Yang, ZHANG Quanbin. 2024.
- 球参多糖的分离纯化及体外抗凝血活性研究
- Isolation, purification, and anticoagulant analysis of polysaccharides from sea cucumber Phyllophorus proteus
- 海洋科学, 48(9): 34-43
- Marine Sciences, 48(9): 34-43.
- http://dx.doi.org/10.11759/hykx20240229003
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文章历史
- 收稿日期：2024-02-29
- 修回日期：2024-04-17
引用本文
刘静雯, 吴宁, 耿丽华, 王晶, 岳洋, 张全斌. 2024. 球参多糖的分离纯化及体外抗凝血活性研究[J]. 海洋科学, 48(9): 34-43.
LIU Jingwen, WU Ning, GENG Lihua, WANG Jing, YUE Yang, ZHANG Quanbin. 2024. Isolation, purification, and anticoagulant analysis of polysaccharides from sea cucumber Phyllophorus proteus[J]. Marine Sciences, 48(9): 34-43.
球参多糖的分离纯化及体外抗凝血活性研究
1. 中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室, 山东 青岛 266071;
2. 中国科学院大学, 北京 100049;
3. 中国科学院海洋大科学研究中心, 山东 青岛 266071
2. 中国科学院大学, 北京 100049;
3. 中国科学院海洋大科学研究中心, 山东 青岛 266071
摘要：球参(Phyllophorus proteus)是一种产于印度尼西亚等热带海域, 具有较大开发利用潜力的低价值海参。本研究利用酶解碱解联用与离子交换柱层析相结合的方法, 从球参中分离到2种硫酸化多糖, 经理化性质分析, 确定2种多糖分别为岩藻聚糖硫酸酯(FS)与岩藻糖化糖胺聚糖(FG)。分别采用Sephadex G-100凝胶柱层析对2种多糖进行纯化, 获得了2种多糖纯化组分, 之后采用稀酸水解FS得到dFS, 采用β-消除降解FG获得dFG。体外抗凝血活性实验结果显示FG能够显著延长活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)时间, 表明其具有非常显著的抗凝血活性。dFG能够显著延长APTT和FIB的凝血时间, 但对PT没有明显影响, 即dFG可以影响内源性凝血途径, 但不能影响外源性凝血途径, 因此调节FG的分子量可以加强对特定凝血途径的选择性作用, 从而在保持较好的抗凝血活性的同时降低出血风险, 以上结果提示FG及dFG均具有开发成为抗凝血剂的潜力。
关键词：球参 岩藻聚糖硫酸酯 岩藻糖化糖胺聚糖 抗凝血
Isolation, purification, and anticoagulant analysis of polysaccharides from sea cucumber Phyllophorus proteus
1. Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Qingdao 266071, China;
2. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China;
3. Center for Ocean Mega-Science, Chinese Academy of Sciences, Qingdao 266071, China
2. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China;
3. Center for Ocean Mega-Science, Chinese Academy of Sciences, Qingdao 266071, China
Abstract: In this study, two sulfated polysaccharides were isolated from Phyllophorus proteus using enzymatic–alkaline coupling and Sepharose DEAE Fast Flow column chromatography, and Sephadex G100 column chromatography was used for further purification. Physicochemical property analysis indicated that the two sea cucumber polysaccharides were fucan sulfate (FS) and fucosylated glycosaminoglycan (FG). Two low molecular weight polysaccharides—dFS and dFG—were obtained through the degradation of FS using 10 mmol/L TFA and degradation of FG via the β-elimination method, respectively. The in vitro anticoagulant assay demonstrated that FG showed good anticoagulant activity and significantly prolonged the clotting times of activated partial thromboplastin time (APTT), prothrombin time (PT), thrombin time (TT), and FIB. dFG significantly prolonged the clotting times of APTT, TT, and FIB but showed no significant effect on the clotting time of PT. Therefore, adjusting the molecular weight of FG can enhance the selective effects on specific coagulation pathways, thus reducing the risk of bleeding while maintaining optimal anticoagulant activities. These results indicated that FG and dFG can be developed as anticoagulants.
Key words:
Phyllophorus proteus fucan sulfate fucosylated glycosaminogiycan anticoagulation
海参属于棘皮动物门、海参纲。自古以来, 海参就是一种传统的滋补佳品, 其在日常保健与药用方面均有巨大的应用潜能[1], 海参体壁含有海参多糖、海参皂苷等活性成分[2], 其中海参多糖主要包括岩藻聚糖硫酸酯(FS)与岩藻糖化糖胺聚糖(FG)[3]两种类型。这2种多糖具有广泛的生物活性, 如抗凝血[4-6]、抗氧化[7-9]、抗肿瘤[10]、降血脂[11]、抗病毒[12]、抗糖尿病[13-15]与免疫调节[16-18]作用。因此, 针对海参多糖的开发利用一直是研究热点[19]。
海参多糖的结构相对规则, 但不同海参来源的多糖在连接方式、硫酸基取代位点等方面仍然存在着相当大的差异, 表现出明显的结构多样性[20]。FS是一种由岩藻糖构成的硫酸化多糖。1994年, Mulloy等[21]对Ludwigothurea grisea来源的FS的研究发现, 该FS具有4个不同硫酸化的岩藻糖通过α-1, 3糖苷键连接组成重复结构单元。大量的研究表明, 多数海参来源的FS均由α-1, 3连接的硫酸化岩藻糖构成主链, 硫酸基常位于岩藻糖的C-2、C-4或C-2, 4位, 部分FS存在岩藻糖构成的侧链。虽然不同海参来源的FS组成与结构相似, 但是其在分子量大小、硫酸基浓度以及连接方式上均有较大的差异[22-25]。
FG主要由硫酸软骨素构成主链骨架, 即葡萄糖醛酸与乙酰氨基半乳糖以β-1, 3与β-1, 4糖苷键交替连接构成主链[26], 其与哺乳动物来源的硫酸软骨素主要区别在于FG主链的葡萄糖醛酸的3位存在着α-1, 3糖苷键连接的岩藻糖侧链, 但是不同海参来源的FG侧链岩藻糖的硫酸基取代位点及比例各不相同[27-29]。正是由于FG的结构差异性, 使得这些多糖有着许多不同的生物活性。FG能够通过由抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)介导的凝血酶(FIIa)和因子Xa(FXa)抑制而表现出抗凝血作用, 并且已经证明分子量和硫酸化程度极大地影响其抗凝血和抗血栓形成活性[30], 此外, FG能够发挥抗凝血作用与其硫酸化岩藻糖支链的存在密切相关[31], 但其构效关系尚未明确。
球参(Phyllophorus proteus)是一种来自印度尼西亚等热带海域的海参。与刺参相比, 球参的产量较大, 但极少被食用, 因此属于具有较大开发利用潜力的低值海参[7]。但目前对球参中硫酸化多糖的研究还非常少见。本研究从球参中分离纯化得到了2种海参多糖FG与FS, 根据其结构特点采取不同的降解策略, 获得了2种多糖的降解产物, 并对其抗凝血活性进行了评价, 以期为球参的高值化应用与开发提供科学依据。
1 材料和方法 1.1 材料和试剂球参产自印度尼西亚海域, 购自京东商城, Sepharose DEAE- Fast Flow凝胶、Sephadex G100凝胶购自美国GE公司, D-甘露糖(Man)、D-葡萄糖醛酸(GlcA)、氨基葡萄糖盐酸盐(GlcN)、氨基半乳糖盐酸盐(GalN)、N-乙酰基-D氨基半乳糖(GalNAc)、D-葡萄糖(Glc)、D-半乳糖(Gal)、L-岩藻糖(Fuc)、D-核糖(Rib)均购自美国Sigma公司, 其他化学药品与试剂均为分析纯。
1.2 球参多糖的制备与分离纯化使用酶解碱解联用的方法提取球参多糖, 将干燥球参用去离子水泡发过夜, 去内脏, 匀浆, 加入1%的木瓜蛋白酶于60 ℃水浴锅中搅拌酶解6 h, 随即加入NaOH溶液至终浓度为0.25 mol/L, 60 ℃搅拌碱解2 h, 加入HCl溶液中和并加热灭酶, 4 000 r/min离心20 min, 收集上清液, 加入95%乙醇至体积分数为60%, 4 ℃静置过夜, 4 000 r/min离心20 min, 弃上清, 沉淀溶解后经透析(截留分子量为3.5 kDa)、减压浓缩、冻干后得球参粗多糖。
粗多糖经Sepharose DEAE Fast Flow阴离子交换色谱柱(2.6×100 cm)层析分级, 采用0~2 mol/L NaCl溶液梯度洗脱, 共收集到4个组分, 分别对应洗脱浓度为0.4 mol/L、1.1 mol/L、1.4 mol/L、2.0 mol/L NaCl。将洗脱液分别进行透析(截留分子量为3.5 kDa)、浓缩和冻干共得到4个分级组分, 主要多糖组分经Sephadex G-100凝胶柱层析进一步纯化。
1.3 分子量与化学组成分析总糖质量分数采用苯酚-硫酸法[32]进行测定, 以L-岩藻糖作为标准品; 岩藻糖质量分数采用半胱氨酸盐酸盐[33]的方法进行测定; 糖醛酸质量分数采用咔唑比色法[25]进行测定; 多糖中的蛋白浓度使用BCA试剂盒测定; 硫酸基质量分数通过明胶氯化钡比色法测定[34]; 多糖分子量采用高效液相色谱法测定[4]; 单糖组成采用PMP-柱前衍生法测定[35]。
1.4 多糖降解岩藻糖化糖胺聚糖组分FG采用β-消除方法进行降解, 取800 mg FG, 溶于12 mL水中, 缓慢滴加苄索氯铵溶液至终浓度为62.5 mg/mL, 4 ℃静置过夜, 4 000 r/min离心15 min, 弃上清, 沉淀用去离子水清洗, 每次4 ℃静置4 h, 重复3次, 沉淀在真空干燥箱中40 ℃烘干得FG-季铵盐沉淀, 用10 mL DMF将其溶解(200 mg/mL), 加入氯化苄0.43 mL, 溶液颜色变为淡黄色, 35 ℃油浴锅搅拌反应25 h, 反应完成后降温至25 ℃, 加入乙醇钠-乙醇溶液至终浓度0.02 mol/L, 继续搅拌反应30 min, 反应完成后加入等体积饱和NaCl溶液及无水乙醇至体积分数80%, 静置6 h, 4 000 r/min离心15 min, 弃上清, 重复醇沉3次, 沉淀加120 mL水溶解, 加4 mol/L NaOH溶液至终浓度0.05 mol/L, 反应30 min, 加入NaBH4至终浓度为0.1 mol/L, 继续反应30 min, 反应结束后用HCl溶液将pH调至中性。使用Sephadex G10凝胶柱脱盐, 再经浓缩、冻干即得β-消除产物dFG。
岩藻聚糖硫酸酯组分FS使用10 mmol/L三氟乙酸(TFA)进行降解, 取200 mg FS, 加入20 mL 10 mmol/L TFA溶解, 100 ℃回流反应, 期间每隔1 h取30 μL反应液, 加0.1 mol/L NaOH调pH至中性, 使用HPLC监测其分子量, 至分子量降至2.0 kDa, 用4 mol/L NaOH溶液调pH至中性, 使用Sephadex G10凝胶柱脱盐, 再经浓缩、冻干即得降解产物dFS。
1.5 IR光谱分析分别取10 mg FG与FS, 采用溴化钾压片, 使用傅里叶变换红外光谱仪(Nicolet iS 10)在4 000~500 cm–1波数范围内进行分析。
1.6 体外抗凝血活性分别使用浓度为5 μg/mL、10 μg/mL与50 μg/mL的FG、FS及dFG、dFS进行复钙实验, 在96孔板中分别加入10 μL各浓度球参多糖样品及40 μL血浆, 振荡20 s, 置于37 ℃烘箱中恒温孵育10 min, 然后快速加入浓度为50 μmol/L的CaCl2溶液50 μL, 每隔30 s测定波长在650 nm处的吸光度, 持续测定30 min。
分别使用APTT、PT、TT与FIB试剂盒对复钙实验结果较好的FG与dFG组分进行抗凝血活性测定。在凝血杯中加入10 μL不同浓度的各球参多糖样品, 随后加入体积比为1∶1的血浆与APTT/PT/TT/ FIB试剂, 终体积为100 μL, 摇匀, 置于凝血仪中测定凝血时间, 以水为空白对照, 以低分子量肝素(LMWH)为阳性对照。使用的羊血浆购自源叶生物公司, APTT、PT、TT试剂盒来自雷根生物公司, FIB试剂盒来自上海太阳生物公司。
1.7 统计分析所有数据均为平均值±标准差(SD), 使用t检验的方法确定各平均值之间的个体差异, 当P<0.05时, 认为有统计学显著差异。
2 结果与讨论 2.1 理化性质分析球参多糖经酶解碱解联用的方法进行提取, 粗多糖的得率为2.86%。取1 g粗多糖经Sepharose DEAE Fast Flow柱层析进行梯度洗脱, 使用0~100%的2 mol/L NaCl溶液洗脱, 根据洗脱曲线(图 1)获得对应洗脱浓度分别为0.4 mol/L、1.1 mol/L、1.4 mol/L、2.0 mol/L NaCl四个分级组分。各组分总糖质量分数、岩藻糖质量分数、硫酸基质量分数、糖醛酸浓度及蛋白质量分数如表 1所示, 其中1.1 mol/L NaCl洗脱组分总糖质量分数为46.63%, 岩藻糖质量分数为13.77%, 硫酸基质量分数为24.36%, 糖醛酸及蛋白质量分数分别为8.07%、3.41%; 2.0 mol/L NaCl洗脱组分总糖质量分数为62.37%, 岩藻糖质量分数为25.32%, 硫酸基质量分数为14.47%, 糖醛酸及蛋白质量分数分别为2.90%、2.20%。
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| 图 1 Sepharose DEAE-Fast Flow梯度洗脱洗脱曲线 Fig. 1 Curve of Sepharose DEAE Fast Flow gradient elution |
表 1 Sepharose DEAE-Fast Flow洗脱组分化学组成 Tab. 1 Chemical composition of elution fractions of Sepharose DEAE Fast Flow distribution
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0.4 mol/L | 1.1 mol/L | 1.4 mol/L | 2.0 mol/L |
| 总糖浓度/% | 25.37 | 46.63 | 62.68 | 62.37 |
| 岩藻糖浓度/% | 0.25 | 13.77 | 23.01 | 25.32 |
| 糖醛酸浓度/% | 1.45 | 8.07 | 5.58 | 2.90 |
| 硫酸基浓度/% | 0.00 | 24.36 | 19.27 | 14.47 |
| 蛋白浓度/% | 30.61 | 3.41 | 1.93 | 2.20 |
分子量测定结果(图 2)显示, 1.1 mol/L NaCl洗脱组分重均分子量(Mw)为67.1 kDa, 2.0 mol/L NaCl洗脱组分重均分子量(Mw)为137.8 kDa。
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| 图 2 Sepharose DEAE-Fast Flow洗脱组分高效液相色谱图 Fig. 2 HPLC results of elution fractions of Sepharose DEAE Fast Flow distribution |
对得到的4个组分进行了单糖组成测定, 结果显示(图 3), 1.1 mol/L NaCl洗脱组分主要单糖组成为GalNAc、GlcA、Fuc, 2.0 mol/L NaCl洗脱组分主要单糖组成为Fuc。
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| 图 3 DEAE-Fast Flow分布洗脱组分单糖组成 Fig. 3 Monosaccharide composition of elution fractions of Sepharose DEAE Fast Flow distribution 注: 1. Man; 2. GlcN; 3. GlcA; 4. GalN; 5. Glc; 6. GalNAc; 7. Gal; 8. Fuc; 9. Rib |
对1.1 mol/L和2.0 mol/L洗脱组分进行红外光谱分析。1.1 mol/L NaCl洗脱组分红外光谱结果(图 4a)显示, 3 366、1 024 cm–1分别为糖环醇羟基O—H和糖环内C—O—C的伸缩振动, 2 940 cm–1为岩藻糖甲基C—H的伸缩振动, 1 218、850、583 cm–1吸收峰显示存在硫酸基的S==O非对称伸缩振动, C—O—S的弯曲振动以及硫酸基S—O的伸缩振动, 1 640 cm–1为乙酰氨基半乳糖的与葡萄糖醛酸上C==O双键的伸缩振动, 1 426 cm–1为葡萄糖醛酸羧基上C—O单键的伸缩振动。
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| 图 4 Sepharose DEAE-Fast Flow分布洗脱组分红外光谱 Fig. 4 Infrared spectra of elution fractions of Sepharose DEAE Fast Flow distribution |
2.0 mol/L NaCl洗脱组分红外光谱结果(图 4b)显示, 3 385、1 025 cm–1分别为糖环醇羟基O—H和糖环内C—O—C的伸缩振动, 2 943 cm–1为岩藻糖甲基C—H的伸缩振动, 1 212、840、572 cm–1吸收峰显示存在硫酸基的S==O非对称伸缩振动, C—O—S的弯曲振动以及硫酸基S—O的伸缩振动。
以上结果表明1.1 mol/L NaCl洗脱组分即为岩藻糖硫酸软骨素FG, 2.0 mol/L NaCl洗脱组分为岩藻聚糖硫酸酯FS。
2.2 FS与FG的纯化使用Sephadex G-100凝胶柱层析分别对FG与FS进行纯化得到FG-G-100与FS-G-100, 洗脱曲线如图 5所示, 结果显示(表 2), 经过Sephadex G-100凝胶柱纯化后, FG的岩藻糖质量分数由13.77%上升至14.48%, 硫酸基质量分数由24.63%上升至28.04%; FS的岩藻糖质量分数由25.32%上升至32.56%, 硫酸基质量分数由14.48%上升至24.05%。对纯化后得到的组分进行高效液相色谱和单糖组成检测, 结果显示(图 6、图 7), 纯化后的组分色谱图更加对称, 分散程度降低; 单糖组成结果显示, 纯化后的组分杂质更少, FG与FS的主要组成单糖质量分数明显上升。
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| 图 5 FG(a)与FS(b)Sephadex G-100凝胶柱层析洗脱曲线 Fig. 5 Elution curves of FG (a) and FS (b) purified through a Sephadex G-100 column |
表 2 岩藻糖化糖胺聚糖(FG)与岩藻聚糖硫酸酯(FS)纯化前后化学组成 Tab. 2 Chemical composition of FG and FS before and after purification
| 分析指标 | FG | FG-G100 | FS | FS-G100 |
| 岩藻糖/% | 13.77 | 14.48 | 25.32 | 32.56 |
| 硫酸基/% | 24.63 | 28.04 | 14.48 | 24.05 |
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| 图 6 Sephadex G100纯化前后FG(a)与FS(b)高效液相色谱图 Fig. 6 HPLC results of FG (a) and FS (b) purified through a Sephadex G100 column |
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| 图 7 FG-G100(a)与FS-G100(b)单糖组成 Fig. 7 Monosaccharide composition of FG (a) and FS (b) purified through a Sephadex G100 column 注: 1. Man; 2. GlcN; 3. GlcA; 4. GalN; 5. Glc; 6. GalNAc; 7. Gal; 8. Fuc; 9. Rib |
为了探究球参多糖的抗凝血活性, 取各样品以10 μg/mL进行复钙实验, 在去钙离子的抗凝血浆中, 重新加入适量的钙离子后, 血浆就发生凝固, 若血浆中加入具有抗凝活性的药物, 血浆凝固的速度就会变慢, 使凝血曲线的斜率降低; 凝固所需的时间会增加, 使凝血曲线达到平台期的时间延长。结果显示(图 8)FG与dFG均能够延迟血浆的凝固时间, 降低血浆凝固的速度, 具有明显的抗凝血活性, 而FS与dFS对血浆的凝固没有明显的影响。
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| 图 8 的FG(a)、dFG(b)、FS(c)及dFS(d)复钙实验结果 Fig. 8 Recalcification experiments of FG (a), dFG (b), FS (c), and dFS (d) |
对于复钙实验抗凝血效果较好的FG与dFG两个组分进行下一步的量效关系研究, 结果显示(图 9), FG在5 μg/mL时没有明显的抗凝血活性, 浓度50 μg/mL时在记录时间内一直使血浆保持未凝固状态, 表现出十分显著的抗凝血活性; dFG在5 μg/mL与10 μg/mL时均表现出抗凝血活性, 且随着浓度的升高活性增强。
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| 图 9 FG(a)与dFG(b)复钙实验量效关系 Fig. 9 Quantitative-effect relationship of FG (a) and dFG (b) |
APTT是衡量内源性凝血途径疗效的性能指标, PT评估外源性凝血途径, TT代表常见的凝血途径。使用APTT、PT、TT和FIB试剂盒评估FG及dFG的抗凝活性, 并与LMWH进行比较。结果(图 10, 表 3)显示, FG具有非常显著的抗凝血活性, 可显著延长APTT、PT、TT和FIB的凝血时间, 使APTT、PTTT和FIB翻倍所需的质量浓度分别为2.77、10.85、8.03和3.36 μg/mL。FG使APTT、PT、TT和FIB持续时间增加1倍所需的浓度低于低分子肝素, 表明其具有非常明显的抗凝血活性。而使APTT、PT、TT和FIB时间翻倍所需的dFG质量浓度分别为9.54、192.88、17.40和33.45 μg/mL, dFG显著延长了APTT、TT和FIB的凝血时间, 但对PT的凝血时间没有显著影响。这些结果表明, dFG可以影响内源性凝血途径和常见凝血途径, 但不能影响外源性凝血途径, 类似于先前报道的Holothuria nobilis来源的dFG[36]。
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| 图 10 APTT(a)、PT(b)、TT(c)and FIB(d)实验结果 Fig. 10 APTT (a), PT (b), TT (c), and FIB (d) of FG and dFG |
表 3 APTT, PT, TT与FIB延长一倍时间所需FG与dFG浓度 Tab. 3 Concentrations of FG and dFG required for doubling APTT, PT, TT, and FIB
| 样品名称 | APTT/(μg·mL–1) | PT/(μg·mL–1) | TT/(μg·mL–1) | FIB/(μg·mL–1) |
| FG | 2.77 | 10.85 | 8.03 | 3.36 |
| dFG | 9.54 | >128 | 17.40 | 33.45 |
| LMWH | 15.21 | >128 | 4.63 | 112.18 |
| 注: APTT: 活化部分凝血活酶时间、PT: 凝血酶原时间、TT: 凝血酶时间、FIB: 纤维蛋白原、LMWH: 低分子量肝素 | ||||
Wu等[37]研究显示来自海参Pearsonothuria graeffei的FG以及降解得到的低分子量寡糖片段均表现出抗凝活性, 能够明显延长APTT与TT, 但是降解后的低分子量片段具有较短的APTT和TT时间, 表明抗凝活性降低。因此, 相对于具有更高抗凝活性的天然FG, 降解后的低分子量片段可能具有更低的出血风险。Li[11]等研究显示, Isostichopus badionotus来源的FG分子量的降低导致活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)显著降低, 抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)和肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)对凝血酶(FIIa)的抑制作用降低, 以及对因子X活性的抑制作用轻微降低, 结果显示低分子量片段能够在具有较好的抗凝血活性的同时减出血的副作用。本文研究结果表明, dFG显著延长了APTT、TT和FIB的凝血时间, 但对PT没有显著影响, 即dFG可以影响内源性凝血途径和共同凝血途径, 但不能影响外源性凝血途径, 这些结果显示调节FG的分子量可以加强对特定凝血途径的选择性作用, 从而在保持较好的抗凝血活性的同时降低出血风险, 但分子量与抗凝血活性之间的具体关系尚不明确, 需要进行更加深入的研究。
3 结论本研究利用酶解碱解联用与Sepharose DEAE- Fast Flow柱层析分离, 并经Sephadex G-100凝胶柱纯化的方法, 从球参中提取到2种多糖, 岩藻聚糖硫酸酯FS与岩藻糖化糖胺聚糖FG, 理化性质分析结果显示, FG为岩藻糖化糖胺聚糖, 由Fuc、GalNAc与GlcA构成, 硫酸基质量分数为28.04%。FS为岩藻聚糖硫酸酯, 仅由Fuc构成, 硫酸基质量分数为24.05%。体外抗凝血活性实验结果显示FG具有显著的抗凝血活性, 能够显著延长APTT、PT、TT和FIB时间。dFG能够显著延长APTT和FIB的凝血时间, 但对PT没有明显影响, 即dFG可以影响内源性凝血途径, 但不能影响外源性凝血途径, 表明调节FG的分子量可以加强对特定凝血途径的选择性作用, 从而在保持较好的抗凝血活性的同时降低出血风险。
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