海洋与湖沼  2015, Vol. 46 Issue (5): 1146-1152   PDF    
http://dx.doi.org/10.11693/hyhz20141100308
中国海洋湖沼学会主办。
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邵艳卿, 方军, 柏艳, 张炯明, 肖国强, 滕爽爽, 刘博, 柴雪良. 2015.
SHAO Yan-Qing, FANG Jun, BAI Yan, ZHANG Jiong-Ming, XIAO Guo-Qiang, TENG Shuang-Shuang, LIU Bo, CHAI Xue-Liang. 2015.
缢蛏(Sinonovacula constricta)EST-SSR标记与生长性状的相关性分析
CORRELATION OF EST-SSR MARKERS WITH GROWTH TRAITS IN RAZOR CLAM(SINONOVACULA CONSTRICTA)
海洋与湖沼, 46(5): 1146-1152
Oceanologia et Limnologia Sinica, 46(5): 1146-1152.
http://dx.doi.org/10.11693/hyhz20141100308

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收稿日期: 2014-11-08
收修改稿日期: 2015-03-24
缢蛏(Sinonovacula constricta)EST-SSR标记与生长性状的相关性分析
邵艳卿1, 方军1, 柏艳1,2, 张炯明1, 肖国强1, 滕爽爽1, 刘博1, 柴雪良1     
1. 浙江省海洋水产养殖研究所 浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室 温州 325000;
2. 温州医科大学 温州 325000
摘要:利用16个微卫星标记对缢蛏F1家系的遗传多样性和标记-性状相关性进行了研究。结果显示, 16个SSR位点共检测到39个等位基因,平均等位基因数(Na)和平均有效等位基因数(Ne)分别为2.44和2.09;多态信息含量(PIC)为0.40;平均观测杂合度(Ho)与期望杂合度(He)分别为0.58和0.63,部分位点基因型分布严重偏离孟德尔定律,暗示其可能与适应性基因相连锁,其中YC-8位点附近可能存在杂合不利存活基因。位点YC-96和YC-123与体重呈显著相关(P < 0.05), YC-96的BC基因型和YC-123的BB基因型均为体重性状的优势基因型,其对应的壳长、壳宽、壳高和体重4个生长性状表型值都最大,可以作为选育快长性状的候选分子标记; YC-1位点与壳宽呈显著相关(P < 0.05),其中BB型是壳宽的优势基因型; YC-93位点与壳宽、壳高呈极显著相关(P < 0.01),其中AB型是壳高的优势基因型, BB和BC型是壳宽的优势基因型。对YC-1、YC-93、YC-96和YC-123进行以体重性状为参照的不同基因型组合比较,找到了最优组合(BB/BB(BC)/BC/BB),与4个位点单独分析对应的最优基因型基本完全一致,符合加性作用模型。筛选出的与生长性状相关的标记可为标记辅助选择育种(MAS)提供参考依据。
关键词缢蛏     EST-SSR标记     生长性状     相关分析    
CORRELATION OF EST-SSR MARKERS WITH GROWTH TRAITS IN RAZOR CLAM(SINONOVACULA CONSTRICTA)
SHAO Yan-Qing1, FANG Jun1, BAI Yan1,2, ZHANG Jiong-Ming1, XIAO Guo-Qiang1, TENG Shuang-Shuang1, LIU Bo1, CHAI Xue-Liang1     
1. Zhejiang Mariculture Research Institute, Zhejiang Key Laboratory of Exploitation and Reservation of Coastal Bio-resource, Wenzhou 325000, China;
2. Wenzhou Medical University, Wenzhou 325000, China
Abstract:We analyzed the genetic diversity and screened the markers associated with growth traits using 16 polymorphic microsatellite markers in an F1 family of razor clam Sinonovacula constricta. Thirty-nine alleles were detected, and the average number of alleles and effective number of alleles were 2.44 and 2.09, respectively. The mean polymorphism information content(PIC) was 0.40. The average observed heterozygosity(Ho) and expected heterozygosity(He) were 0.58 and 0.63, respectively. The genotype distribution of partly loci deviated severely from Mendel's Laws, suggesting that these loci might link with the adaptive gene, and locus YC-8 may link with heterozygous lethal genes. Loci YC-96 and YC-123 showed significant impact on shell weight(P < 0.05). Genotypes BC at YC-96 and BB at YC-123 were favorable for shell weight, featuring highest phenotype value in shell weight, length, width, and height, respectively; and therefore can be used as molecular markers in selection breeding. Locus YC-1 showed a significant impact on shell width(P < 0.05), in which BB was a dominant genotype of shell width. Locus YC-93 showed an extremely significant effect on shell width and shell height(P < 0.01), in which AB was the dominant genotype of shell height, and BB and BC were the dominant genotypes of shell width. The best genotype combinations(BB/BB(BC)/BC/BB) for YC-1, YC-93, YC-96 and YC-123 were selected for body weight, which conforms to the additive model.
Key words: razor clam Sinonovacula constricta     EST-SSR marker     growth trait     correlation analysis    

缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)俗称蛏(福建)、蜻(浙江)或跣(我国北方),其肉味鲜美,营养丰富,含有丰富的蛋白质、维生素和无机盐。除供鲜食外,还可制成蛏干、蛏油等,是消费者喜爱的海产食品,也是我国传统四大养殖贝类之一(王如才等,2008)。缢蛏养殖历史悠久,过去主要集中在福建和浙江一带,随着缢蛏养殖业的不断扩展和人工育苗技术日渐成熟,江苏、山东等地纷纷引进苗种,有力地推动了缢蛏养殖业的发展。然而,目前人工苗的亲蛏绝大多数来自人工养殖,其种质属于未经遗传改良的野生种,在经过多年累代繁、养殖之后,出现了成活率低、生长速度减慢和抗病力下降等生产性状退化现象; 加之,无序的养殖、盲目引种和养殖环境的日益恶化,已经严重制约了缢蛏养殖业的健康持续发展(王兴强等,2006; 刘博等,2013)。因此,采用有效方法培育出高产、抗逆的缢蛏优良品种成为突破瓶颈、带动产业快速发展的当务之急。

利用分子遗传标记进行标记辅助选育,是当今动物遗传育种研究的热点之一。微卫星也称简单重复序列(simple sequence repeat,SSR),是由1-6个核苷酸组成的简单串联重复DNA序列(Tautz D,1989),按照其来源可分为基因组SSR(G-SSR)和表达序列标签SSR(EST-SSR)。微卫星标记具有数量多、多态性丰富、共显性遗传、重复性好等优点(Zane et al,2002; 刘芳等,2006),在筛选水产动物形态、抗病、抗逆、性别等经济性状相关标记方面已被广泛使用,如在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)(Rodriguez et al,2004)、鲤鱼(Cyprinus carpio)(张义凤等,2008; 顾颖等,2009)、南美白对虾(Litopenaeus vannamei)(Zhang et al,2007)、马氏珠母贝(Pinctada martensii)(邓岳文等,2013)、文蛤(Meretrix meretrix)(Lu et al,2013; Nie et al,2013)等都已有相关报道,而缢蛏在性状相关标记筛选方面则还未见报道。本研究首先构建缢蛏全同胞家系,进而采用SSR技术对其分子特征进行检测,并结合其数量性状度量,筛选与缢蛏生长性状显著相关的分子标记,以期为缢蛏生长性状的QTLs定位、分子标记辅助育种和新品种培育提供参考依据。

1 材料与方法 1.1 实验材料

所用缢蛏样品为2011年10月在浙江省海洋水产养殖研究所清江基地培育的全同胞(F1)家系(包含父母本样品),养殖一龄后随机取120颗,测量壳长、壳高、体重等指标,解剖取肌肉组织,固定于90%乙醇中备用。

1.2 DNA提取、PCR扩增及检测

基因组DNA采用常规的苯酚/氯仿/异戊醇法抽提,用紫外分光光度计测定浓度,再用无菌水统一调至100ng/µL,-20°C保存备用。PCR反应体系总体积为25µL,包括10×PCR buffer 2.5µL,25mmol/L MgCl2 2.5µL,2.5mmol/L dNTPs 2µL,上下游引物(10µmol/L)各1.0µL,5U/µL Taq DNA聚合酶(TaKaRa)0.13µL,DNA模板1.0µL,加灭菌双蒸水至25µL。PCR扩增程序为: 94°C预变性5min,进入30个PCR循环[94°C 30s,退火温度(表 1)30s,72°C 30s],最后72°C下延伸7min。扩增产物经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,硝酸银染色。

本实验所用引物来自刘博等(2012)已发表的和后续自主设计开发。所有引物均由上海生工生物工程有限公司合成,根据亲本筛选出16对多态性引物用于后续研究(表 1)。

表 1 本研究选用的微卫星位点、核心序列、引物序列和退火温度 Tab. 1 Microsatellite loci,repeat motif sequence,prime sequence and annealing temperature used in this study
位点 核心序列 引物序列(5'→3') 扩增片段大小(bp) 退火温度(°C)
YC-1 (ATCT)5 F: CGTTTTGAACGTTACATTGTT 130—133 54
R: TAACTTTCTCTGCAGCTTGAC
YC-3 (ACAT)3 F: TCAAATTGTGATCCGTACTCT 148—158 54
R: CACCATTACAAAACATCACCT
YC-8 (AAAGT)3 F: CTCATAAGTACCCCTGTGCTA 138—142 56
R: AATACCCACGTAACATTTCTG
YC-35 (AC)8 F: GAGCCTGATCTATTGCCTTAT 142—158 55
R: TGAGAATGTTTCTTCTACAGG
YC-49 (GA)6 F: CCACAAACTTTTCCCTCC 198—205 50
R: CGGAATTAGCCAATCAGA
YC-58 (TCA)7 F: GAGTCTTCGAAATCTTCATCA 150—158 50
R: AAAAACTCCATCTACCAAGGA
YC-87 (CT)8 F: CCAGACAGCATACATAAGAGG 165—175 47
R: ACGCTGACATAAATGAAAAAC
YC-93 (GGC)4 F: GTCCTCTGTTTCTGTTTCTCC 138—148 47
R: CAGAAGGTTCTGAAGAAGTACC
YC-94 (GGT)5 F: GTGGCTCTTCTAACAGAGGTT 147—150 47
R: CATTTAGGCTTTCTCAGTGTG
YC-96 (TACA)5 F: TAAGGGTTTTGAAATTGTGTG 128—140 50
R: GCTCATTTAGAGCTTATGGTG
YC-98 (TG)8 F: CCTGAATATCAGCATCAAGAA 135—150 53
R: GTTCATTCCTTCAATCAACTG
YC-106 (AC)6 F: GAAAACCTAGGAAAGAACTGC 150—160 55
R: TTATTCCTCTAAAAGGCTTCC
YC-115 (TC)6 F: ACATCTGTATGCATTTCATCT 145—158 47
R: CTAATATGCAAAGGTGGTCTG
YC-116 (AAT)5 F: CGATTGCTGCAAGATAATATAC 143—150 53
R: ACTAGCATGTATGATCGGAAA
YC-123 (AT)6 F: ACAACAATAGTTTTGGTTTGC 168—170 47
R: CCATGTTTGTAAAAACCAACT
YC-125 (TAA)5 F: AGAACATGCCATAAGCATAAC 140—153 53
R: CACCTAGGCACATTGTAGTTC
F 表示正向引物; R 表示反向引物
1.3 数据分析与统计

根据电泳图谱,并参照引物设计时预期片段的大小判读、统计条带。用PopGene(Verion3.2)软件计算各位点在子代中的等位基因频率(allele frequency)、等位基因数(observed number of alleles,Na)、有效等位基因数(effective number of alleles,Ne)和观测杂合度(observed heterozygosity,Ho); 根据亲本的基因型推算各位点在子代的期望杂合度(expected heterozygosity,He); 根据Botstein等(1980)的公式计算出多态性信息含量(PIC)。

用SPSS19.0软件中的卡方检验分析各位点在子代中的分离比是否符合孟德尔遗传; 用一般线性模型(general linear model,GLM)对SSR位点基因型与主要生长性状(壳长、壳宽、壳高和体重)进行相关性分析,经方差分析检验呈显著性差异的位点,使用Duncan法进行多重比较。

2 结果与分析 2.1 缢蛏的生长指标分析

随机取缢蛏F1家系120个个体,分别测量其壳长、壳宽、壳高、体重的生长指标,测量结果见表 2,4个生长性状都呈现连续变异的特点,符合典型的数量性状或多基因遗传特点。通过K-S单样本正态分布检验,结果显示其壳长、壳宽、壳高与体重的P值分别为0.56、0.30、0.25和0.57,均符合正态分布(表 2),适合作为标记与性状相关分析的材料。

表 2 壳长、壳宽、壳高、体重的表型数据及正态分布检验 Tab. 2 The phenotypic data of shell length,width,height, and weight, and normal distribution test
性状 最小值 最大值 平均值±SD 偏度 峰度 K-S值 P
壳长 38.45mm 57.58mm 49.16±4.15mm -0.23 -0.53 0.79 0.56
壳宽 10.41mm 19.90mm 14.83±2.08mm -0.11 -0.73 0.97 0.30
壳高 9.04mm 18.79mm 14.48±2.51mm 0.02 -1.15 1.02 0.25
体重 2.63g 11.48g 6.78±1.95g 0.39 -0.34 0.79 0.57
2.2 缢蛏SSR遗传多样性分析及其基因型分布情况

用16个SSR位点对缢蛏亲本及其子代120个个体进行了PCR扩增,其中有1个子代个体PCR产物电泳条带不够理想,因此舍弃了该个体。遗传参数统计结果表明(表 3): 16个位点共检测到39个等位基因,各位点的等位基因数2—4个,平均2.44,平均有效等位基因数为2.09; 观测杂合度在0.36—1.00之间,平均为0.58; 期望杂合度在0.50—1.00之间,平均为0.63; 多态信息含量(PIC)在0.25—0.70之间,平均值0.40。

表 3 16个微卫星位点在缢蛏F1家系的统计信息 Tab. 3 Statistic information for 16 microsatellite loci in an F1 family of S. constricta
位点 亲本基因型 N a N e H o H e PIC F 1的基因型分布 P
YC-1 AB×AB 2 1.98 0.37 0.50 0.37 AA: AB: BB=31: 44: 44 0.242
YC-3 AB×BB 2 1.42 0.36 0.50 0.25 AB: BB=43: 76 0.002
YC-8 AB×AB 2 1.92 0.27 0.50 0.36 AA: AB: BB=56: 32: 31 0.006
YC-35 BC×AD 4 3.71 1.00 1.00 0.68 AB: AC: BD: DC=19: 31: 17: 48 0.000
YC-49 AA×AB 2 1.55 0.46 0.50 0.29 AA: AB=64: 55 0.409
YC-58 AB×BC 3 2.62 0.73 0.75 0.55 AB: BB: AC: BC=24: 32: 29: 32 0.691
YC-87 AA×AB 2 1.64 0.53 0.50 0.31 AA: AB=55: 63 0.461
YC-93 AB×BC 3 2.56 0.71 0.75 0.54 AB: BB: AC: BC=16: 32: 27: 37 0.034
YC-94 AB×AA 2 1.73 0.61 0.50 0.33 AA: AB=47: 72 0.022
YC-96 BB×AC 3 2.67 1.00 1.00 0.55 AB: BC=59: 58 0.926
YC-98 AC×BD 4 4.00 1.00 1.00 0.70 AB: BC: AD: DC=22: 35: 38: 21 0.047
YC-106 BB×AB 2 1.51 0.43 0.50 0.28 AB: BB=50: 66 0.137
YC-115 BB×AB 2 1.58 0.49 0.50 0.30 AB: BB=57: 60 0.782
YC-116 BB×AB 2 1.53 0.45 0.50 0.29 AB: BB=53: 66 0.233
YC-123 AB×BB 2 1.52 0.44 0.50 0.28 AB: BB=52: 67 0.169
YC-125 AB×AA 2 1.52 0.44 0.50 0.28 AA: AB=66: 52 0.197
平均值 2.44 2.09 0.58 0.63 0.40

根据亲本和子代的基因型判读统计。16个位点中有4个位点子代具有4种基因型,为1:1:1:1(BC×AD/AB×BC/AC×BD)的分离类型; 10位点属1:1分离类型,其中4个为雄亲杂合雌亲纯合,6个为雌亲杂合雄亲纯合; 2个位点属1:2:1(AB×AB)分离类型。根据卡方检验,有10个位点(62.5%)的子代基因型分布处于平衡状态(P>0.05),其它位点(37.5%)都不同程度地偏离了平衡(P<0.05或P<0.01)(表 3)。

2.3 缢蛏生长性状相关SSR位点分析与多重比较

对每个SSR位点的不同基因型进行分类,结合表型数据进行关联分析,结果在16个SSR位点中,发现共有4个位点与缢蛏生长性状表现出一定的相关性,其中YC-1与壳宽显著相关(P<0.05); YC-93与壳宽、壳高均极显著相关(P<0.01); YC-96与体重显著相关(P<0.05); YC-123位点与壳高、体重均显著相关(P<0.05)。

将这4个有显著相关的位点进行不同基因型间的不同性状的多重比较(Duncan法),结果如下(表 4): 在标记YC-1中,基因型BB个体的壳长、体重、壳宽值均高于AA和AB个体,但仅在壳宽性状上呈显著差异(P<0.05),推测BB基因型是壳宽的优势基因型,等位基因A可能起负面影响。

表 4 4个微卫星位点不同基因型壳长、宽、高与体重的多重比较 Tab. 4 Multiple comparisons of major growth traits with different genotypes at 4 microsatellite loci
位点 基因型 个体数 壳长(mm) 壳宽(mm) 壳高(mm) 体重(g)
YC-1 BB 44 49.16±4.15 15.45 a±2.06 14.12±2.44 7.05±2.24
AA 31 49.09±4.22 14.46 b±2.06 14.98±2.63 7.03±2.04
AB 44 48.78±3.36 14.46 b±2.01 14.50±2.49 6.33±1.47
YC-93 AB 16 49.99±3.42 13.94 B±1.63 15.80 A±2.59 7.25±1.55
AC 27 48.26±4.32 14.05 B±2.11 14.81 AB±2.63 6.24±1.72
BC 37 49.04±5.02 15.34 A±2.14 13.94 B±2.54 6.85±2.40
BB 32 49.23±3.37 15.29 A±2.06 14.00 B±2.11 6.78±1.76
YC-96 BC 58 49.56±4.13 14.89±2.00 14.84±2.55 7.15 a±1.99
AB 59 48.70±4.21 14.68±2.15 14.20±2.46 6.40 b±1.88
YC-123 BB 67 49.79±4.14 14.77±2.18 14.88 a±2.45 7.12 a±2.03
AB 52 48.35±4.06 14.90±1.96 13.97 b±2.51 6.35 b±1.76
数值右肩不同小写字母表示在一个位点中不同基因型之间差异显著(P < 0.05), 大写字母表示差异极显著(P < 0.01), 未标注的表示基因型之间差异不显著(P>0.05)

在标记YC-93中,基因型BC和BB个体的壳宽值极显著高于AB和AC个体(P<0.01),说明等位基因A对壳宽起负面影响;在壳高性状上则是基因型AB和AC个体极显著或显著高于BC和BB个体(P<0.01或P<0.05),说明等位基因A对壳高起正面影响;4种基因型在体重上AB型个体最大,但与其它3种基因型个体均未达到显著差异水平。

在标记YC-96中,基因型BC个体的平均壳长、壳宽、壳高、体重值均高于AB个体,在平均体重性状上差异显著(P<0.05),可说明BC基因型是体重性状的优势基因型,而等位基因A起负面影响。

在标记YC-123中,基因型BB个体的平均壳高、体重值均显著高于AB个体(P<0.05),说明基因型BB对壳高、体重起正面影响,等位基因A起负面影响。

2.4 最优基因型组合筛选

因为体重一般是水产动物最终收获的主要经济性状,因此,本研究以体重为参照指标对这4个位点不同基因型组合进行比较。由于4个位点中某些基因型组合出现频率太少,缺少分析价值,因此在实际统计分析中,每种基因型组合至少有3次观察值才被考虑。YC-1、YC-93、YC-96和YC-123四个位点的基因型分别有3、4、2和2种基因型,可形成48种组合,因在标记YC-93和YC-96中分别有7个和2个个体未检测到基因型,因此样本数为110。在检测的110个个体中实际出现了32种基因型组合,16种基因型组合的个体没出现。对32种不同基因型组合的体重表型值进行比较,获得的最优基因型组合为BB/BB(BC)/BC/BB,与4个位点单独分析对应的最优基因型基本完全一致,符合加性作用模型(表 5)。

表 5 缢蛏 F 1家系的不同基因型组合对应体重排序统计表 Tab. 5 The statistics to body weight value with different genotype combinations in an F 1 family of S. constricta
排序 基因型组合 YC-1/YC-93/YC-96/YC-123 平均体重(g) 个体数
1 BB/BB/BC/BB 8.08±1.40 3
2 BB/BC/BC/BB 7.91±2.56 11
3 AA/AB/BC/BB 7.85±1.29 5
4 AB/AC/BC/BB 7.39±0.54 5
5 BB/BC/AB/AB 7.38±2.44 5
6 AB/BB/BC/AB 6.67±1.11 6
7 AA/AB/BC/AB 6.62±1.77 5
8 AA/AB/AB/BB 6.36±1.81 3
9 BB/BC/BC/AB 6.31±2.14 8
10 AB/AC/AB/BB 6.28±1.65 5
11 AB/AC/AB/AB 6.16±1.14 6
12 BB/BC/AB/BB 6.13±2.76 8
13 AB/BB/AB/BB 6.05±1.78 13
14 AA/AC/AB/AB 4.92±1.80 4
3 讨论 3.1 缢蛏家系遗传结构分析

NeHoHe和PIC是反映群体遗传多样性的重要参数,数值越大,表明群体遗传结构越复杂,进而说明基因丰富度越高(李春艳,2009)。本文中,缢蛏家系群体的Ne=2.09,Ho=0.58,He=0.63和PIC=0.40,可以看出该缢蛏家系的遗传多样性水平处于中等水平,普遍低于已报道的缢蛏不同地理养殖群体和野生群体的遗传多样性水平(牛东红等,2011; 刘达博等,2011; 刘博等,2013),出现这种现象的原因可能与本文研究的对象是全同胞家系群体有关。

另外,本研究的16个位点的期望杂合度多数与观测杂合度基本一致,说明实验中测量缢蛏家系群体的这些位点的基因频率和基因型频率稳定性较好,除了位点YC-8的期望杂合度(He=0.50)明显大于观测杂合度(Ho=0.27),表现出F1代个体的分离方式严重偏离孟德尔分离规律(P<0.01)。分析该位点在F1群体中的基因型分布,发现杂合子AB个体很少,仅占全部观测个体的26.9%(理论上应50%); 而纯合子AA个体很多,占全部观测个体的47.1%(理论上只占25%)。这提示该位点附近可能存在着不利于杂合子AB个体而利于纯合子AA个体存活的基因。位点YC-35严重偏离孟德尔分离定律(P=0.000),其原因是由于基因型AB和BD个体(AB:AC:BD:DC=19:31:17:48,理论上应1:1:1:1)出现频率显著偏低,暗示该位点可能存在与B连锁的基因不利于缢蛏存活,有待于进一步深入研究。

多态信息含量(PIC)是衡量基因变异程度高低的重要指标,可以反应出基因座位在群体中的多态性高低。研究利用的16个SSR位点,据Botstein等(1980)的界定标准,有5个位点表现为高度多态位点(PIC>0.50),11个表现为中度多态位点(0.25<PIC< 0.50),16个位点的平均PIC为0.40,说明本实验筛选出的EST-SSR标记在该缢蛏家系中具有中等偏上的多态性,具备进一步辅助选育优良种质的价值。

3.2 缢蛏生长性状相关分子标记的筛选

微卫星标记具有保守性好、呈共显性遗传的特点,是近年来发展迅速、应用广泛的分子标记,也是分析与重要经济性状的遗传连锁关系最理想的标记之一,目前已经被广泛应用于水产动物生长、抗病、性别等性状相关分子标记筛选。例如Lu等(2013)利用双向选择性分型筛选出3个与文蛤(Meretrix meretrix)生长QTL紧密连锁的EST-SSR标记,并用单向选择性分型对其进行了验证; Song等(2012)利用半滑舌鳎(Cynoglossus semiliaevis)F1家系构建高密度遗传连锁图谱,并进行性状-标记之间的回归分析,得到2个与生长性状相关(P<0.01)的SSR标记; Guo等(2012)基于全同胞家系构建长牡蛎(Crassostrea gigas)的性别平均连锁图,检测到3个生长相关的QTLs和一个性别相关的QTL; Rodriguez等(2004)利用雄性硬头鳟和雌性虹鳟(Oncorhynchus mykiss)杂交产生的雄性F1回交雌性虹鳟产生70个家系(BC1),从每个F1和BC1家系中取近100个体进行IHN病毒感染,表型性状采用1(感染后死亡)和0(感染后存活),筛选到6 个微卫星标记和IHNV抗性有关,为进一步将与抗性有关的基因进行定位、克隆奠定基础。在本实验中,共找到了4个与生长性状显著相关的EST-SSR标记,其中YC-93与缢蛏的壳宽、壳高性状极显著相关,YC-123与壳高、体重性状显著相关,而位点YC-1和YC-96仅与壳宽或体重一个性状显著相关,可初步确定这些位点为与生长相关的候选标记; 尤其是位点YC-96的BC基因型和YC-123的BB基因型的个体体重性状均显著高于同一标记的其它基因型的个体,推测这两个基因型为体重优势基因型,可用于对缢蛏体重性状进行辅助选育。

后续的研究工作中,将对筛选到的这些候选标记进行进一步的分析与验证,探讨其能否作为缢蛏标记辅助育种的有效分子标记。

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